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　　中国试剂网 3.10.1.9 禽流感病毒 RNA 提取 protocol 1．用异硫氰酸胍提取 1.取 200ul 样品数+阴性对照+阳性对照个 1.5ml 灭菌 eppendorf 管 2.加 600ul 异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加 200ul 氯仿，颠倒混匀 3.13000rpm 离心 15min 4.在第 3 步离心快结束时，另取同样多 eppendorf 管，加入 400ul -20 度预冷的异丙醇 5.取第 3 步离心的上清（一定不要吸取到中间白色层，第 3 步离心结束往外拿的时候，管子尽量不要倾斜）转移到第 4 步准备的管中，颠倒混匀 6.13000rpm 离心 15min，轻轻...

　　中国试剂网 3.10.1.9 禽流感病毒 RNA 提取 protocol 1．用异硫氰酸胍提取 1.取 200ul 样品数+阴性对照+阳性对照个 1.5ml 灭菌 eppendorf 管 2.加 600ul 异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加 200ul 氯仿，颠倒混匀 3.13000rpm 离心 15min 4.在第 3 步离心快结束时，另取同样多 eppendorf 管，加入 400ul -20 度预冷的异丙醇 5.取第 3 步离心的上清（一定不要吸取到中间白色层，第 3 步离心结束往外拿的时候，管子尽量不要倾斜）转移到第 4 步准备的管中，颠倒混匀 6.13000rpm 离心 15min，轻轻倒去上清；在吸水纸上尽量沾干液体 7.加 600ul 75％乙醇，颠倒数次以洗涤残存异丙醇 7.13000rpm 离心 15min，轻轻倒去上清；在吸水纸上尽量沾干液体 8.4000rpm 离心 10sec，将管壁残存液体甩到底部，用微量枪头吸干，室温干燥 2－3min（不可过分干燥，防止下一步 RNA 不溶解） 9.加入 20ul DEPE 水(加入 depc 的纯水高压后的水即为 DEPE 水)， 轻轻混匀溶解RNA。2000rpm 离心 5sec，冰上保存备用（最好 2 小时内使用，以免 RNA 降解） 2，用 TRIzol LS 提取 应用 TRIzol LS 提取病毒 RNA 所提取物为血清、血液、细胞培养液、鸡胚尿囊液等液体中的病毒。提取时尽量在人少时进行，防止空气中 RNA 酶的污染。所用一切物品也应是无 RNA 酶的。 1.1 在 1.5ml 的 eppendorf 管中加入病毒原液 500ul，再加入 TRIzol LS 500ul，充分混匀，室温放置 10min。 1.2 加入 200ul 的氯仿，盖紧离心管盖，用力震荡离心管（溶液充分乳化，成乳白状，无分相现象） ，室温放置 10min （由于氯仿沸点低、易挥发，振荡时离心管可能爆开，小心） 。 1.3 离心 4℃、13000r/min、15min，取上层液相移入另一管（切忌吸动白色中间相） 。 1.4 加入等体积异丙醇，轻轻颠倒离心管充分混匀液体，室温放置 10min。 1.5 离心 4℃、13000r/min、15min， （这时乍一看会发现管子里好像没有东西，